ADH，使用犬抗利尿激素ELISA试剂盒需要注意什么？

ADH，使用犬抗利尿激素ELISA试剂盒需要注意什么？

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被犬抗利尿激素（ADH）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的犬抗利尿激素（ADH）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

1.  检测范围：1 pg/mL – 32 pg/mL。

2.  灵敏度：检测浓度小于0.1 pg/mL。

3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15%

犬抗利尿激素（ADH）ELISA试剂盒的工作原理基于酶联免疫吸附测定（ELISA）技术，具体流程如下：

1. ‌固相抗原包被‌

微孔板预先包被与犬ADH结构相似的抗原（可能为重组ADH或合成多肽）‌27。该抗原通过物理吸附固定在孔板表面，保留免疫学活性‌46。

2. ‌竞争性结合反应‌

• ‌样品/标准品处理‌：待测犬样本（如血清、血浆）中的ADH与生物素标记的ADH类似物同时加入孔板‌78。

• ‌竞争结合‌：样本中的天然ADH与生物素标记的ADH竞争结合孔板中有限的ADH特异性抗体结合位点‌37。ADH浓度越高，与抗体结合的生物素标记ADH越少，形成竞争性抑制关系‌38。

3. ‌洗涤与信号放大‌

• ‌去除未结合物质‌：洗涤去除未结合的游离ADH和抗体复合物‌46。

• ‌酶标二抗结合‌：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，与生物素标记的ADH-抗体复合物结合‌38。

4. ‌显色与定量分析‌

• ‌底物反应‌：加入TMB显色底物，HRP催化底物生成蓝色产物，反应终止后变为黄色‌46。

• ‌浓度计算‌：通过检测450 nm波长下的吸光度值，吸光度与样本中ADH浓度呈负相关（即ADH浓度越高，显色越浅）‌37。标准曲线法可精确计算ADH浓度‌38。

‌技术特点‌

• ‌检测范围‌：通常覆盖pg/ml级别（如0.781-50 pg/ml），灵敏度高‌37。

• ‌特异性‌：依赖抗体对ADH的特异性识别，可排除其他类似结构干扰‌27。

• ‌应用场景‌：适用于犬体液样本中ADH的定量检测，用于研究水电解质平衡、肾功能异常等‌

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