T4 ELISA检测试剂盒 （酶联免疫法）竞争法原理

线性范围：0.62-40 ng/mL

1. 预期用途

本试剂盒设计用于定量检测血清、血浆、组织匀浆、细胞上清、细胞裂解物等样本中的待测物浓度，仅供研究使用，不得用于医学诊断。

2. 检测原理 

试剂盒采用竞争法原理：将合成半抗原包被于酶标板上，同时加入样品和抗体试剂（一抗），样品中的待测物与半抗原上偶联的待测物竞争结合抗体（一抗），结合形成“半抗原-抗体"免疫复合物，清洗去除游离的免疫复合物后，加入TMB显色，样本中待测物浓度越高蓝色越浅，加入终止液，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物含量呈反比，通过绘制标准曲线计算出样本中待测物的浓度。

3. 包含的实验材料实验材料

如需单独采购通用型组分，请提供对应的组分名称。

4. 需要但未包含的实验材料

· 蒸馏水或去离子水，一次性离心管、一次性手套等耗材；

· 移液器、多通道移液器及配套枪头；

· 烧杯、量筒、试剂瓶等容器具；

· 用于封贴微孔板的封板膜或其他替代材料；

· 微孔板振荡器（如有需要）、离心机、旋涡振荡器等辅助设备；

· 恒温培养箱、恒温水浴箱、酶标仪、洗板机。

5. 试剂的准备及储存

· 1×洗液的配制：浓缩洗液（20×）如有晶体析出，需在37℃下加热至晶体全部溶解后使用。用蒸馏水1:20稀释，例如：10mL浓缩洗涤液加入190mL的蒸馏水，混合均匀。

· 1×通用稀释液的配制：用蒸馏水1:20稀释，例如：10mL的20×浓缩通用稀释液加入190mL的蒸馏水，混合均匀。

· 工作校准品的配制：校准品开封前应离心30秒，确保所有校准品集中于底部；

准备7个离心管，将10×校准品按需吸取一定量用“1×通用稀释液"稀释10倍配制成校准品S1。例：50uL的10×校准品+450uL的“1×通用稀释液"，制备得到500μL的S1浓度校准品。在随后的6个离心管中分别加入250μL的“1×通用稀释液"，在这6个试管中（S2~S7）将S1校准品依次倍比稀释6个梯度至S7，共配制7个浓度的校准品，依次为：S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7，如下图所示，“1×通用稀释液"作为零浓度校准品S0，共8支校准品。

· 

6. 样品采集、预处理及储存

· 血清：使用血清采集管采集全血，室温静置待血细胞凝集后取的血清，或直接在1000×g下离心15分钟取得血清。操作应柔和，避免溶血发生。获取的血清应及时进行检测，如不能及时进行检测，应等分为多份，储存在-20℃及以下温度条件，储存时间不超过6个月，样品冻融不超过2次。

· 血浆：使用EDTA或肝素采血管收集血浆。全血采集后以1000×g离心15分钟取得血浆。操作应柔和，避免溶血发生。获取的血浆应及时进行检测，如不能及时进行检测，应等分为多份，储存在-20℃及以下温度条件，储存时间不超过6个月，样品冻融不超过2次。

· 组织：组织称重后剪碎，将剪碎的组织加入裂解液，一般按1:4-1:9的重量体积比，比如100mg的组织样品对应400uL的裂解液，具体可根据实验需要适当调整，最后将匀浆液于5000×g离心5-10分钟，取上清检测。

· 细胞：取适量细胞，于冰上进行超声破碎，5000×g离心5-10分钟，取上清检测。

· 细胞上清：取细胞上清于5000×g离心5-10分钟，取上清检测。

7. 实验步骤

使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右，也可置于37℃温箱快速回温至室温。

注意：酶标板未恢复室温前，请勿开封。

8.  结果计算

建议使用四参数逻辑（4-P）曲线拟合：以浓度值为横坐标，吸光度值为纵坐标；

建议使用专业化软件进行结果拟合和计算，如ELISA CALC、SPSS、Graphpad Prism等。示例数据

以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

9. 检测的局限性

样本浓度超出检测范围上，应当进行适当加大稀释倍数后再次检测，计算结果应当乘上稀释倍数。样本浓度低于LOQ定量，检测结果无法进行准确定量。

10. 产品性能指标

以下结果基于校准品的浓度值实验得出，未纳入基质效应等其他因素的潜在影响。

灵敏度：0.38ng/mL。

精密度：板内精密度CV＜10%（N=20），板间精密度CV＜15%（N=20）。

特异性（Analytical specificity）：其他相关因子在稀释缓冲液中制备为10μg/mL测定，没有观察到明显的交叉反应。 

T4 ELISA检测试剂盒 （酶联免疫法）竞争法原理

T4 ELISA检测试剂盒 （酶联免疫法）竞争法原理