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科研ELISA试剂盒是干什么用的,又该怎么用呢?

更新时间:2020-07-21      浏览次数:1693
   科研ELISA试剂盒即酶联吸附试验,是一种常用的固相酶免疫测定方法。Engvall 和Perlmann于1971年应用该法进行了IgG定量测定,并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。
  科研ELISA试剂盒免疫测定的目的:
  1.测定体液中的各种蛋白质,包括含量极少的蛋白质如甲胎蛋白等;
  2.测定激素,包括小分子量的甾体激素等;
  3.测定抗生素和药物;
  4.测定病原体抗原,HBsAg、HBeAg等;
  5.利用纯化的抗原检测标本中的抗体,例如抗-HBs等;
  ELISA的基本原理
  ①使抗原(或抗体)结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性;
  ②使抗原(或抗体)与某种酶联结成酶标 抗原(或抗体),而且此酶标抗原(或抗体)既保留其免疫活性,又保留其酶活性;
  ③测定时将受检标本(抗体或抗原)和酶标抗原(或 抗体)按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应,再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开,后结合 在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例;再加入酶反应底物后,底物被酶催化后变为有色产物,根据其颜色反应的 深浅进行定性或定量分析,以了解被测标本中抗体或抗原含量。
  科研ELISA试剂盒实验方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在中 除正常反应外,有时常可见到一些错误结果(即假阳性或假阴性结果)。引起ELISA测定错误结果的原因主要有:①标本因素;②试剂因素;③操作因素。本文就标本因素对ELISA测定的影响做如下讨论。
  科研ELISA试剂盒实验步骤
  1.包被;
  2.加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔);
  3.加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
  4.加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟;
  5.终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml;
  6.结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm处,以空白对照孔调零后测各孔OD值。
  血清是ELISA标本,血浆一般可视为与血清同等的标本,标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致,分为内源性物质和外源性物质两种。
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