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上海仁捷生物教你ELISA检测试剂盒常见问题处理

更新时间:2017-08-03      浏览次数:1282

ELISA检测试剂盒常见问题处理
 
出现问题出现问题的原因解决办法
曲线
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
OD值不正常
 
 
 
 
 
 
 
试剂盒未回温试剂盒回温到25℃
温度控制不好控制正确温度
孵育时间不准确控制孵育时间
洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加洗涤4-5次,每孔250ul,然后拍干
阳光直射,对着风直接吹避风避光
酶标仪的波长错误酶标仪的波长450nm
抗体的稀释错误正确的稀释抗体
水质问题用娃哈哈矿泉水代替
 
白   板
 
 
洗涤液配制错误正确的配制洗涤液
少加液体(抗体、酶标记物、A液、B液)正确的步骤加液体
错加液体 
 
无 梯 度
 
 
标准品也污染换标准品点板
OD值不正常控制温度时间在做一次
人为点板/
线 性 不 好
 
OD值不正常控制温度时间在做一次
人为点板/
回  收  率
 
 
 
 
 
 
 
空白管阳性高
 
 
样本本身就是阳性样本换阴性样本做回收率
空白管在实验中被污染实验中防止交叉污染
水质原因用娃哈哈矿泉水代替
 
 
偏  高
 
 
 
 
添加量不准确的添加量
添加浓度不适合添加合适的浓度
取液吹干量多准确的取液吹干
取到其它相层液体取需用相吹干
复溶液未稀释或加入量少正确的稀释复溶液
 
偏  低
 
 
 
添加量不准确的添加量
添加浓度不适合添加合适的浓度
取液吹干量少准确的取液吹干
复溶液稀释错误或加入量多正确的稀释复溶液
 
 
假阴、阳性
 
 
 
 
 
水质原因点复溶液验证用娃哈哈矿泉水代替
实验操作原因
 
 
 
吸取到其它相吹干准确的取液吹干
离心不*延长离心时间
样本的污染更换样本
乳化未处理*温浴(70℃)处理乳化现象
仪器试剂原因
 
离心管未清洗干净正确的洗涤器具
有机溶剂的影响做试剂空白看影响结果
衍生化试剂原因(长时间衍生化试剂变质)更换衍生化试剂
与曲线好坏相关保证曲线的正常
 
 
金标检测(T)线颜色较浅
 
 
尿液pH偏碱性用0.01M HCl调节尿液pH值到7.0左右。
尿样滴加过多重新测定,尿样按照说明书,控制在2滴
尿液过于混浊将尿液离心后,取上清液重新测定
 
 
金标质控(C)线不出现
 
 
 
 
 
 
检测卡由于高温、受潮等原因失效尿样需要重新检测。
过了有效期失效。该批号的金标应丢弃处理,尿液需要重新检测
 
操作过程中检测卡没有平放,导致液体样品直接冲过检测区尿样需要重新检测,且检测卡平放于桌面上再加样。
尿液样品中含有较高的抑制或者干扰抗原抗体反应的物质(比如明矾、小苏打、氧化剂、肌酐等)该尿液的检测结果无效
金标卡上在除了T和C线之外的其他地方出线金标卡上的划痕;胶体金在跑板过程中没有*跑干净而在卡上的痕迹;该检测卡结果不可信,尿液需要重新检测。
实验重复性不好操作人员的不一致,取样的不一致,样本数量的多少,加样时间的长短,洗涤条件不一致,加样量不一致尽量保持的实验一致性
 
分析软件的使用
 
不能设置和保存正确的设置和保存
如何判断曲线的好坏和分析结果正确的判断曲线的好坏和分析结果
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